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參考資料 8398

用于全基因組變異評估的人類 DNA

（猶他州之女/歐洲血統(tǒng)）

(HG-001)

此參考材料 (RM) 旨在用于驗證、優(yōu)化和過程評估目的。它由猶他州/歐洲血統(tǒng)的女性全.人類基因組樣本組成，可用于評估基因組測序中變異調(diào)用的性能。一個 RM 8398 單元由一個裝有人類基因組 DNA 的小瓶組成，該基因組 DNA 是從單個大生長的人類淋巴母細(xì)胞系 GM12878（標(biāo)記為 HG-001）中提取的。

科里爾醫(yī)學(xué)研究所（新澤西州卡姆登）。該小瓶含有大約 10 µg 基因組 DNA，DNA 位于 TE 緩沖液（10 mM TRIS，1 mM EDTA，pH 8.0）中。

該材料旨在通過獲得真陽性、假陽性和假陰性的估計值來評估人類基因組測序變異檢出的性能。測序應(yīng)用可能包括全基因組測序、全外顯子組測序和更有針對性的測序，例如基因組。這種基因組 DNA 的分析方式與實驗室處理和分析提取的 DNA 的任何其他樣本相同。由于 RM 是提取的 DNA，因此它對于評估 DNA 提取等分析前步驟沒有用處，但它確實挑戰(zhàn)了測序文庫的制備、測序機器以及作圖、比對和變異調(diào)用的生物信息學(xué)步驟。此 RM 并非旨在評估后續(xù)的生物信息學(xué)步驟，例如功能或臨床解釋。

NIST SRM 8398 人類DNA 全基因組變異評估

信息值：

為單核苷酸變異 (SNV)、小插入和缺失 (indel) 以及純合參考基因型提供信息值。 v3.3.2 基準(zhǔn)測試集涵蓋了大約 91% 的 GRCh37 組件和 85% 的 GRCh38 組件（不包括組件中的間隙），使用方法參考 1 中描述的信息值。信息值被認(rèn)為是 RM 用戶感興趣和使用的值，但沒有足夠的信息來評估與該值相關(guān)的不確定性。我們使用當(dāng)前可用的數(shù)據(jù)和方法描述和傳播我們對基因型的最佳、最自信的估計。隨著新數(shù)據(jù)的積累以及測量和信息學(xué)方法的出現(xiàn)，這些數(shù)據(jù)和基因組特征將隨著時間的推移而得到維護(hù)。 HG-001 的數(shù)據(jù)可在國家生物技術(shù)信息中心 (NCBI) 序列讀取檔案的 BioSample SAMN03492678 下找到。信息值以變體調(diào)用文件 (vcf) 的形式給出，其中包含基準(zhǔn) SNV 和小插入缺失，以及一個制表符分隔的“床"文件，該文件描述了基準(zhǔn)區(qū)域，其中任何不在基準(zhǔn) vcf 中的其他變體都應(yīng)該是錯誤。信息值不能用于建立計量溯源性。

RM 8398來自人類淋巴母細(xì)胞系，用于研究用途。既然沒有達(dá)成共識

提取DNA的感染狀態(tài)，處理RM 8398成分作為生物安全等級1的材料

根據(jù)疾病預(yù)防控制中心(CDC)辦公室的建議，傳播傳染病

安全，健康，環(huán)境和國家衛(wèi)生研究院(NIH)[2]。

儲存和使用說明

儲存:RM 8398在NIST儲存在-20°C，但將與冷凍包一起運輸，可能不會冷凍到達(dá)。

NIST SRM 8398 人類DNA 全基因組變異評估收到后應(yīng)在-20°C的黑暗處長期保存，或在4°C的黑暗處短期保存

儲存(如果即將使用)。

使用:建議在將vcf與基準(zhǔn)vcf進(jìn)行比較后，只使用基準(zhǔn)中的變量

區(qū)域被認(rèn)為是真陽性、假陽性和假陰性。另外，要了解原因

假陽性和假陰性，包括基準(zhǔn)集中潛在的錯誤，強烈建議使用

在假定的假陽性和假陰性的子集周圍，用戶使用

基因組瀏覽器。為性能指標(biāo)和工具開發(fā)標(biāo)準(zhǔn)化定義，以比較不同的調(diào)用

全球基因組學(xué)和健康團(tuán)隊聯(lián)盟發(fā)布了最佳實踐

對于人類基因組中生殖系小變異呼叫的基準(zhǔn)，我們強烈建議遵循[3]。

隨著測序技術(shù)和分析方法的改進(jìn)，這些基準(zhǔn)呼叫和區(qū)域?qū)⒏?/span>

本調(diào)查報告將定期更新至

反映重要的新發(fā)布。當(dāng)前版本包含相對于GRCh37的小變體基準(zhǔn)集

和來自基因組參考聯(lián)盟的GRCh38參考組件。來自各種技術(shù)的數(shù)據(jù)集

對于這個基因組的描述見文獻(xiàn)4。

源制備(1)

科里韋爾醫(yī)學(xué)研究所(Camden, NJ)在多個階段對其細(xì)胞系GM12878進(jìn)行了大量生長，

提取大約83毫克的DNA，然后混合DNA，和DNA一起放入小瓶

大致相等地分成小瓶。具體來說，細(xì)胞池被分成三個單獨的DNA體積

提取后，將提取的DNA重新混合，在4℃下輕輕混合48 h以上，再取料

自動分配到10 μg DNA的小瓶中。

注:該RM是分離的DNA而不是活細(xì)胞，因為細(xì)胞不太穩(wěn)定，可以隨每個細(xì)胞發(fā)生突變

因此活細(xì)胞的序列可能不會隨著時間的推移而穩(wěn)定。從大量細(xì)胞中提取DNA

有助于確保所有小瓶含有基本相同的DNA序列。DNA現(xiàn)在可以從這個地方找到

但其DNA序列可能含有微小的差異

不同批次的細(xì)胞發(fā)生不同的突變。

穩(wěn)定性:通過脈沖場凝膠測量DNA的大小分布來評估穩(wěn)定性

電泳(但是脈沖場凝膠電泳的出現(xiàn))。使用PFGE，在4℃保存8個樣品后，未檢測到尺寸分布的變化

在37℃保存8周后，其大小分布明顯下降。此外，沒有變化

經(jīng)過5次凍融循環(huán)、大力移液或渦旋后檢測。然而，因為我們只測量尺寸